Б. Тишинский переулок,
д. 43/20 стр.2
+7 (499) 252-36-09

ФОРМИРОВАНИЕ ТКАНЕИНЖЕНЕРНОЙ КОНСТРУКЦИИ ХРЯЩЕВОЙ ТКАНИ В УСЛОВИЯХ IN VITRO

Сургученко В.А.1, 3, Пономарева А.С.1, 3, Кирсанова Л.А.2, Бубенцова Г.Н.2, Скалецкий Н.Н.2, Севастьянов В.И.1, 3


1 Лаборатория биоматериалов и систем доставки (зав. – д. б. н., проф. В.И. Севастьянов) ФГБУ «Федеральный научный центр трансплантологии и искусственных органов им. ак.В.И. Шумакова» Минздрава РФ (директор – академик РАМН, проф. С.В. Готье), Москва, Российская Федерация

2 Лаборатория клеточной трансплантации (зав. – д. м. н. Н.Н. Скалецкий) ФГБУ «Федеральный научный центр трансплантологии и искусственных органов им. ак. В.И. Шумакова» Минздрава РФ (директор – академик РАМН, проф. С.В. Готье), Москва, Российская Федерация

3 АНО «Институт медико-биологических исследований и технологий» (директор – д. б. н., проф. В.И. Севастьянов), Москва, Российская Федерация

Сургученко Валентина Александровна – к. ф.-м. н., старший научный сотрудник лаборатории биоматериалов и систем доставки (зав. – д. б. н., проф. В.И. Севастьянов) ФГБУ «Федеральный научный центр трансплантологии и искусственных органов им. ак. В.И. Шумакова» Минздрава РФ (директор – академик РАМН, проф. С.В. Готье), Москва, Российская Федерация. 

Севастьянов Виктор Иванович – д. б. н., профессор, заведующий лабораторией биоматериалов и систем доставки того же центра; директор АНО «Институт медико-биологических исследований и технологий», Москва, Российская Федерация. 

Пономарева Анна Сергеевна – научный сотрудник той же лаборатории. 

Скалецкий Николай Николаевич – д. м. н., заведующий лабораторией клеточной трансплантации того же центра. 

Кирсанова Людмила Анфилофьевна – к. б. н., старший научный сотрудник той же лаборатории. 

Бубенцова Галина Николаевна – научный сотрудник той же лаборатории.


Для корреспонденции: Севастьянов Виктор Иванович. Адрес: 123182, г. Москва, ул. Щукинская, д. 1.

Телефон: раб. 8 (499) 196-88-74; моб. 8 (926) 275-61-90. E-mail: viksev@yandex.ru.

Цель. Доказательство возможности формирования в условиях in vitro тканеинженерной конструкции хря- щевой ткани на основе клеточно-инженерной конструкции, состоящей из биополимерного гидрогелево- го матрикса и мезенхимальных стромальных клеток жировой ткани человека. Материалы и методы. В качестве биодеградируемого матрикса был выбран биополимерный материал – композиция гетероген- ного имплантируемого геля Сферо®ГЕЛЬ (производитель ЗАО «БИОМИР сервис», г. Краснознаменск, Московская обл.). Для получения тканеинженерной конструкции мезенхимальные стромальные клетки из подкожно-жировой клетчатки человека смешивали с биополимерным матриксом и культивировали в индукционной хондрогенной среде. Результаты. Показано, что под воздействием индукционной хондро- генной среды культуры мезенхимальных стромальных клеток жировой ткани человека в сочетании с био- полимерным матриксом образуют трехмерные структуры и синтезируют компоненты внеклеточного мат- рикса, характерные для хрящевой ткани: коллаген II типа и гликозаминогликаны. Заключение. В процессе культивирования клеточно-инженерных конструкций хрящевой ткани образуются трехмерные структуры, которые начинают продуцировать компоненты собственного внеклеточного матрикса. Это свидетельству- ет о начальных стадиях формирования тканеинженерных конструкций хрящевой ткани в условиях in vitro.

Ключевые слова: биополимерный матрикс, гидрогель, мезенхимальные стромальные клетки, жировая ткань, хондрогенная дифференцировка, тканеинженерная конструкция.

FORMATION OF TISSUE-ENGINEERED CONSTRUCT OF CARTILAGE IN VITRO

Surguchenko V.A.1, 3, Ponomareva A.S.1, 3, Kirsanova L.A.2, Bubentsova G.N.2, Skaletskij N.N.2, Sevastianov V.I.1, 3

1 Laboratory of biomaterials and delivery systems (Head – doct. of biol. sci., prof. V.I. Sevastianov) Academician V.I. Schumakov Federal Research Center of Transplantology and Artificial Organs (Head – academician of RAMSci, prof. S.V. Gautier), Moscow, Russian Federation

2 Laboratory of cell transplantation (Head – doct. of med. sci. N.N. Skaletskiy) Academician

V.I. Schumakov Federal Research Center of Transplantology and Artificial Organs, (Head – academician of RAMSci, prof. S.V. Gautier), Moscow, Russian Federation

3 Institute of Biomedical Research and Technology (ANO) (Head – doct. of biol. sci., prof. V.I. Sevastianov), Moscow, Russian Federation

Surguchenko Valentina Aleksandrovna – cand. of phys.-math. sci., senior research fellow of laboratory of biomaterials and delivery systems (Head – doct. of biol. sci., prof. V.I. Sevastianov) Academician V.I. Schumakov Federal Research Center of Transplantology and Artificial Organs (Head – academician of RAMSci, prof. S.V. Gautier), Moscow, Russian Federation.

 Sevastianov Viktor Ivanovich – doct. of biol. sci., prof., head of laboratory of biomaterials and delivery systems at the same center; Head of Institute of Biomedical Research and Tech- nology (ANO), Moscow, Russian Federation. 

Ponomareva Anna Sergeevna – research fellow at the same laboratory. 

Skaletskiy Nikolay Nikolaevich – doct. of med. sci., head of laboratory of cell transplantation the same center. 

Kirsanova Lyudmila Anfilofievna – cand. of biol. sci., senior research fellow at the same laboratory. 

Bubentsova Galina Nikolaevna – research fellow at the same laboratory.

For correspondence: Sevastianov Viktor Ivanovich. Adress: 123182, Moscow, Schukinskaya, 1. Phone: work: 8 (499) 196-88-74; cell.: 8 (926) 275-61-90. E-mail: viksev@yandex.ru.

Aim. The goal of this study was to demonstrate the possibility of in vitro formation of tissue-engineered construct of cartilage on the basis of cell-engineered construct composed of biopolymer hydrogel matrix and human adipose-derived mesenchymal stromal cells. Materials and methods. As a biodegradable matrix, the hetero- geneous composition of the implantable gel Sphero®GEL (Biomir Service, Krasnoznamensk, Moscow Region) was selected. To generate cell-engineered construct of cartilaginous tissue human adipose-derived mesenchy- mal stromal cells were mixed with biopolymer matrix Sphero®GEL and cultured in chondrogenesis medium. Results. It was revealed that human adipose-derived mesenchymal stromal cells with biopolymer matrix under chondrogenic conditions generate three-dimensional structures and produce cartilaginous extracellu- lar matrix components: collagen type II and glycosaminoglycans. Conclusion. It was discovered that 3-D structures formed in the process of culture of cell-engineered constructs, began to synthesize the components of the cartilage extracellular matrix. This indicates the initial stage of in vitro formation of tissue-engineered cartilage construct.


Key words: biopolymer matrix, hydrogel, mesenchymal stromal cells, adipose tissue, chondrogenic differentiation, tissue-engineered construct.

ВВЕДЕНИЕ

В настоящее время дегенеративные заболевания суставов приобретают все большую социально-ме- дицинскую значимость. Заболеваемость остеоарт- розом занимает в мире лидирующее место среди болезней суставов и наблюдается практически во всех возрастных группах.

Отсутствие в суставном хряще кровоснабжения, а также низкий уровень метаболизма из-за малого количества клеток в единице объема ткани приво- дят к тому, что полноценная репаративная регене- рация хряща возможна лишь при небольших по площади повреждениях [1]. При обширных пов- реждениях хрящевой ткани, сопровождающихся разрушением надхрящницы, регенерацию хряще- вой ткани опережает развитие грануляционной ткани в месте дефекта [2]. Консервативное лечение патологий сустава, а также применение таких опе- ративных техник, как стимуляция костного мозга, субхондральное просверливание кости, микропе- реломы и закрытие дефекта надкостничными или перехондриальными трансплантатами, а также час- тичное или полное эндопротезирование не всегда приводит к приемлемым результатам [3–6]. Метод лечения хряща, основанный на аутохондротранс- плантации, получил большое коммерческое разви- тие [7, 8]. Однако этот метод также не лишен недостатков, основные из которых – травматичность биопсии здорового участка хряща, возможность де- дифференцировки хондроцитов в условиях in vitro, включая фибробластоподобную перестройку [9] и неполное восстановление хрящевой ткани. В свя- зи с этим в качестве альтернативы данному методу были рассмотрены варианты замены хондроцитов на мезенхимальные стромальные клетки (МСК), ко- торые присутствуют во всех органах и тканях чело- веческого организма и обладают мультилинейным потенциалом дифференцировки в адипогенном, ос- теогенном и хондрогенном направлениях [10, 11]. Одним из перспективных источников МСК, благодаря простоте технологии выделения, достаточно- му выходу клеток и минимальной травматичности для пациента, является жировая ткань (ЖТ). Было показано, что МСК ЖТ адгезивны к поверхности культурального пластика, фибробластоподобны, по совокупности поверхностных антигенов соот- ветствуют фенотипу мезенхимальных стромальных клеток, обладают способностью к мультилинейной дифференцировке в мезенхимальные линии [12, 13]. Применение подходов клеточной и тканевой инже- нерии, заключающихся в трансплантации МСК на матриксах-носителях, представляет собой перспек- тивный способ лечения дефектов хряща с исполь- зованием функциональных тканевых заменителей.


Основная цель применения матриксов – это достав- ка и удержание клеток в месте повреждения, а так- же обеспечение клеткам необходимого трехмерного окружения для формирования хрящевой ткани [14]. Матриксы для хрящевой ткани изготавливают из полимерных материалов синтетического или при- родного происхождения в виде гидрогелей, губок или волокнистых сеток [15].

Целью работы являлось доказательство возмож- ности формирования в условиях in vitro тканеинже- нерной конструкции хрящевой ткани (ТИК ХТ) на основе клеточно-инженерной конструкции (КИК), состоящей из биополимерного гидрогелевого мат- рикса и мезенхимальных стромальных клеток жи- ровой ткани человека (МСК ЖТч).

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Получение и культивирование МСК ЖТч

Мезенхимальные стромальные клетки получали из образцов подкожно-жировой клетчатки челове- ка по стандартной методике, описанной ранее [13]. Кратко, жировую ткань отмывали от крови в фосфат- но-солевом растворе с добавлением антибиотиков, механически измельчали до получения гомогенной массы, которую затем обрабатывали раствором кол- лагеназы Type IA (Sigma, # C98891, США) из рас- чета 600 ед./г ткани. Фермент инактивировали рос- товой средой (РС) для мезенхимальных стволовых клеток человека MesenPRO RS™ без глютамина, с ростовыми добавками MesenPRO RS™ Growth Sup- plement (Gibco® by Life Technologies™, USA). Клетки осаждали центрифугированием при 400 g, в течение 15 мин. Осадок фильтровали через набор фильтров с диаметром пор 100 мкм и 70 мкм, ресуспендировали в РС и рассеивали в культуральные флаконы (Corn- ing-Costar, США). Культивирование осуществляли в стандартных условиях: при температуре 37 °С

во влажной атмосфере, содержащей (5 ± 1)% СО2. Замену РС проводили каждые 3 суток. Визуально культуру оценивали с помощью инвертированного

микроскопа (Micros MC700, Австрия). В экспери- ментах использовали МСК ЖТч 2–3 пассажей.


Биополимерный гидрогелевый матрикс

В качестве биодеградируемого матрикса был выбран зарегистрированный в России биополи- мерный гидрогель – композиция гетерогенного имплантируемого геля Сферо®ГЕЛЬ (производи- тель ЗАО «БИОМИР сервис», г. Краснознаменск, Московская область). Сферо®ГЕЛЬ изготовлен на основе компонентов внеклеточного матрикса тка- ней сельскохозяйственных животных, обладает высокими биосовместимыми и биостимулирую- щими свойствами и предназначен для замещения дефектов мягких тканей, включая применение в клеточных технологиях. Инъекционная форма мат- рикса Сферо®ГЕЛЬ выпускается в шприцах. Время биорезорбции составляет от нескольких недель до нескольких месяцев в зависимости от условий и места имплантации [14].


Дифференцировка МСК ЖТч в хондрогенном направлении

Индукцию хондрогенной дифференцировки МСК ЖТч в условиях in vitro осуществляли с ис- пользованием набора для хондрогенной дифферен- цировки STEMPRO® Chondrogenesis Differentiation Kit (Invitrogen, USA) в 3-D-культуре методом «мик- росфер» в соответствии с инструкцией производите- ля. Для этого проводили посев МСК ЖТч в концент- рации 16 × 106 кл/мл в стандартной РС, добавляя по 10 мкл полученной суспензии на дно лунок 96-лу- ночного культурального планшета, через 2 ч инку- бации в лунки вносили хондрогенную дифференци- ровочную среду и культивировали при температуре 37 °С во влажной атмосфере, содержащей (5 ± 1) % СО2. Замену среды осуществляли каждые 3 суток.

Получение клеточно-инженерной конструкции хрящевой ткани

Для получения клеточно-инженерной конс- трукции хрящевой ткани (КИК ХТ) МСК ЖТч по- слойно смешивали с биополимерным матриксом Сферо®ГЕЛЬ в концентрации 2 × 106 кл/мл матрик- са и культивировали в индукционной хондрогенной среде при температуре 37 °С во влажной атмосфере, содержащей (5 ± 1) % СО2. Замену среды осуществ- ляли каждые 3 суток. Время инкубации в диффе- ренцировочной среде составило 14, 28 и 42 суток.


Гистология

Образцы микросфер и ТИК ХТ фиксировали в 10% растворе формалина в течение 4 ч, промывали в проточной воде и обезвоживали в этаноле с вос- ходящими концентрациями, обезжиривали в смеси абсолютного этанола с хлороформом или ксилолом и заливали в парафин с добавлением пчелиного воска. Срезы толщиной 4–5 мкм получали с помо- щью микротома Leica (модель RM 3255, Германия). Гистологические препараты депарафинизировали и окрашивали гематоксилином и эозином, альциано- вым синим, по методу Маллори согласно стандарт- ным методикам.


Иммуногистохимическое окрашивание антителами к коллагену человека II типа

Визуализацию окрашивания препаратов на кол- лаген человека II типа осуществляли с использованием Novocastra™ Concentrated Peroxidase Detec- tion System (RE7130-K, Leica Microsystems), следуя инструкции производителя. Перед окрашиванием депарафинизованные гистологические срезы под- вергали ретривизации инкубацией в 0,1% растворе трипсина при 37 °С в течение 30 мин. После ин- кубации с Novocastra™ Peroxidase Block, Novocas- tra™ Protein Block, оптимально разведенными пер- вичными антителами к коллагену человека II типа, вторичными антителами и Novocastra™ Concen- trated Streptavidin-HRP, срезы каждый раз дважды промывали в течение 5 мин раствором 0,5 M трис- буфера, pH = 7,6 (Sigma, США). Затем срезы про- мывали дистиллированной водой, докрашивали Novocastra™ Hematoxylin (RE7107, Leica Microsys- tems), проводили по восходящим концентрациям этанола, инкубировали с ксилолом и заключали в канадский бальзам. Реакция с пероксидазой вызы- вает видимый коричневый осадок в области место- положения антигена.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Хондрогенная дифференцировка МСК ЖТч в 3D-культуре

Через 5 суток в хондрогенной среде МСК ЖТч образовывали трехмерные структуры в виде не- прозрачных микросфер диаметром ~ 1 мм. Гисто- логическая оценка полученных структур показала, что микросферы на 5-е сутки дифференцировки имеют рыхлую неоформленную структуру и не дают специфического окрашивания по Маллори и альциановым синим на коллаген и ГАГ, соот- ветственно. Уже через 7 суток дифференциров- ки периферия каждой микросферы представлена 1–2 слоями фибробластоподобных жизнеспособ- ных клеток, появляются тонкие волокна коллаге- на и сине-зеленое окрашивание, характеризующее появление ГАГ во внеклеточном матриксе. Через10 суток наблюдается прогрессивное врастание фибробластоподобных клеток внутрь микросфер и заполнение ими центральной части, заметное и явное увеличение коллагеновых волокон, а так- же ГАГ. Через 14 суток хондрогенной дифферен- цировки МСК ЖТч (рис. 1, а) наблюдается про- грессивное образование ГАГ (рис. 1, б), коллагена (рис. 1, в), в сферах появляются отдельные локусы, заполненные внеклеточным матриксом, синтези- рованном клетками, составляющими микросфе- ру. Матрикс в поверхностной зоне представлен пучками коллагеновых волокон, расположенных параллельно поверхности микросферы, что харак- терно для нормальной хрящевой ткани. Иммуно- гистохимическое окрашивание антителами пока- зало, что коллагеновые волокна в микросферах являются коллагеном II типа – основной тип кол- лагена хрящевой ткани (рис. 1, г).



Рис. 1

Хондрогенная дифференцировка МСК ЖТч в 3-D-культуре (микросферы), 14 дней: 

а – окрашивание гематок- силином и эозином;

б – окрашивание альциановым синим на гликозаминогликаны (указано стрелками); 

в – окраши- вание на коллаген по методу Маллори (указано стрелками);

г – иммуногистохимическое окрашивание антителами к коллагену человека II типа (указано стрелками). ×200

Морфологические изменения КИК ХТ

Через 14 суток дифференцировки МСК ЖТч, послойно смешанных с матриксом Сферо®ГЕЛЬ, наблюдали образование трехмерных структур раз- мером ~ 6 мм. Результаты гистологической оценки полученных структур показали, что через 14 дней в толще биополимерного матрикса присутствуют клетки с различными морфологическими характе- ристиками: фибробластоподобные с вытянутым яд- ром и овальные с округлым ядром (рис. 2, а); точно установить тип клеток затруднительно. Показано образование собственного внеклеточного матрикса, имеющего волокнистую структуру, коллагеновая природа которой подтверждается при специфичес- ком окрашивании по методу Маллори (рис. 2, б). Через 28 суток количество клеток овальной формы с округлым ядром в срезах значительно увеличива- ется, клеточная популяция становится более одно- родной, встречаются хондробластоподобные клет- ки. Обнаружено заметное увеличение количества внеклеточного матрикса, вырабатываемого клетка- ми в процессе культивирования. Собственный вне- клеточный матрикс имеет волокнистую структуру (рис. 3, а, б).

К сожалению, на сроках 14 и 28 суток нам не удалось выявить наличие коллагена II типа в по- лученных конструкциях, возможно, вследствие недостаточного количества клеток или слишком малого времени дифференцировки. К 42-м сут- кам хондрогенной дифференцировки наблюдали продолжение увеличения клеточной массы, про- растание клеток в толщу матрикса Сферо®ГЕЛЬ и увеличение количества внеклеточного матрикса, вырабатываемого клетками. Наблюдали спонтан- ное образование сфероподобных структур, сход- ных с микросферами, полученными из МСК ЖТч в 3D-культуре (рис. 3, в, г). Также было обнару- жено цитоплазматическое окрашивание клеток антителами к коллагену человека II типа, что мо- жет говорить о начале синтеза клетками коллагена II типа (рис. 4).

Рис.2a


 ТИК ХТ, 14 дней: а – окрашивание гематоксилином и эозином;

Рис. 2б


 б – окрашивание по методу Маллори; 1 – МСК ЖТч; 2 – биополимерный матрикс Сферо®ГЕЛЬ. ×400

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Таким образом, показано, что образующиеся в процессе культивирования КИК ХТ трехмерные структуры, состоящие из дифференцированных в хондрогенном направлении МСК ЖТч, начинают продуцировать компоненты собственного внекле- точного матрикса. Это свидетельствует о началь- ных стадиях формирования ТИК ХТ в условиях in vitro. Можно предположить, что на более поздних сроках внеклеточный матрикс ТИК ХТ начнет пос- тепенно замещать резорбирующийся биополимер- ный матрикс Сферо®ГЕЛЬ с образованием хрящевой ткани.


Рис. 3

ТИК ХТ: 

а – 28 дней хондрогенной дифференцировки. Окрашивание гематоксилином и эозином. 

B – 28 дней хондрогенной дифференцировки. Окрашивание по методу Маллори. 

C, D – 42 дня хондрогенной дифференциров- ки. Окрашивание гематоксилином и эозином. Микросфероподобные структуры указаны стрелками; 

1 – МСК ЖТч; 

2 – биополимерный матрикс Сферо®ГЕЛЬ. ×200

Рис. 4

ТИК ХТ, 42 дня хондрогенной дифференциров- ки. Иммуногистохимическое окрашивание антитела- ми к коллагену человека II типа (указано стрелками).

×1000

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Melero-Martin J.M., Al-Rubeai M. In vitro expansion of chondrocytes. Topics in Tissue Engineering. 2007; 3: 37.

Мазуров В.И. Болезни суставов. СПб.: «СпецЛит», 2008: 27–31.

Drakos M.C., Allenin A.A. Nonoperative Treatment Op- tions for Symptomatic Cartilage Lesions. Williams R.J., editor. Cartilage repair strategies. Totowa, New Jersey: Humana Press, 2007: 55–68.

Деев Р.В. Анализ рынка клеточных препаратов для коррекции патологии скелетных тканей. Клеточная трансплантология и тканевая инженерия. 2006; 2 (4): 78–83.

Solomon D.J., Williams R.J., Warren R.F. Marrow Stimu- lation and Microfracture for the Repair of Articular Car- tilage Lesions. Williams R.J., editor. Cartilage repair stra- tegies. Totowa, New Jersey: Humana Press, 2007: 69–84.

Miniaci A., Jambor C., Petrigliano F.A. Autologous Os- teochondral Transplantation. Williams RJ, editor. Car- tilage repair strategies. Totowa, New Jersey: Humana Press, 2007: 105–114.

Redman S.N., Oldfield S.F., Archer C.W. Сurrent stra- tegies for articular cartilage repair. European Cells and Materials. 2005; 9: 23–32.

Jones D.G., Peterson L. Autologous Chondrocyte Im- plantation. Williams R.J., editor. Cartilage repair strate- gies. Totowa, New Jersey: Humana Press, 2007: 137– 166.

Marlovits S., Hombauer M., Truppe M., Vecsei V., Schle- gel W. Changes in the ratio of type-I and type-II collagen expression during monolayer culture of human chondro- cytes. J. Bone Joint Surg. 2004; 86B (2): 286–295.

Mehlhorn A.T., Schmal H., Kaiser S., Lepski G., Finken- zeller G., Stark G.B., Sudkamp N.P. Mesenchymal Stem Cells Maintain TGF-b-Mediated Chondrogenic Phe- notype in Alginate Bead Culture. Tissue Engineering. 2006; 12 (6): 1393–1403.

Danišovič Ľ., Lesný P., Havlas V., Teyssler P., Syrová Z., Kopáni M., Fujeríková G., Trč T., Syková E., Jendelo- vá P. Chondrogenic differentiation of human bone mar- row and adipose tissue-derived mesenchymal stem cells. Applied Biomedicine. 2007; 5: 139–150.

Zuk P.A., Zhu M., Mizuno H., Huang J., Futrell W., Katz A.J., Benhaim P., Lorenz P., Hedrik M.H. Multilinea- ge cells from human adipose tissue: implications for cell- based therapies. Tissue engineering. 2001; 17: 211–228.

Егорова В.А., Пономарева А.С., Богданова Н.Б., Абрамов В.Ю., Севастьянов В.И. Характеристика фенотипа МСК из жировой ткани человека методом проточной цитометрии. Технологии живых систем. 2009; 5: 40–46.

Севастьянов В.И., Перова Н.В., Немец Е.А., Сургу- ченко В.А., Пономарева А.С. Примеры эксперимен- тально-клинического применения биосовместимых материалов в регенеративной медицине. В книге: Биосовместимые материалы (учебное пособие) / Под ред. В.И. Севастьянова и М.П. Кирпичникова. М.: Изд-во «МИА», 2011; II (3): 237–252.

Chung C., Burdick J.A. Engineering Cartilage Tissue, Adv. Drug. Deliv. Rev. 2008; 60 (2): 243–260.

REFERENCES

Melero-Martin J.M., Al-Rubeai M. In vitro expansion of chondrocytes. Topics in Tissue Engineering. 2007; 3: 37.

Mazurov V.I. Joint diseases. SPb.: «SpetsLit», 2008: 27–31 (in rus).

Drakos M.C., Allenin A.A. Nonoperative Treatment Op- tions for Symptomatic Cartilage Lesions. Williams R.J., editor. Cartilage repair strategies. Totowa, New Jersey: Humana Press, 2007: 55–68.

Deev R.V. Market analysis of cell substances for skel- etal tissue pathologies correction. Kletochnaja trans- plantologija i tkanevaja inzhenerija. 2006; 2 (4): 78–83. (in rus).

Solomon D.J., Williams R.J., Warren R.F. Marrow Sti- mulation and Microfracture for the Repair of Articular Cartilage Lesions. Williams R.J., editor. Cartilage repair strategies. Totowa, New Jersey: Humana Press, 2007: 69–84.

Miniaci A., Jambor C., Petrigliano F.A. Autologous Os- teochondral Transplantation. Williams RJ, editor. Car- tilage repair strategies. Totowa, New Jersey: Humana Press, 2007: 105–114.

Redman S.N., Oldfi eld S.F., Archer C.W. Сurrent stra- tegies for articular cartilage repair. European Cells and Materials. 2005; 9: 23–32.

Jones D.G., Peterson L. Autologous Chondrocyte Im- plantation. Williams R.J., editor. Cartilage repair strate- gies. Totowa, New Jersey: Humana Press, 2007: 137– 166.

Marlovits S., Hombauer M., Truppe M., Vecsei V., Schle- gel W. Changes in the ratio of type-I and type-II collagen expression during monolayer culture of human chondro- cytes. J. Bone Joint Surg. 2004; 86B (2): 286–295.

Mehlhorn A.T., Schmal H., Kaiser S., Lepski G., Finken- zeller G., Stark G.B., Sudkamp N.P. Mesenchymal Stem Cells Maintain TGF-b-Mediated Chondrogenic Phe- notype in Alginate Bead Culture. Tissue Engineering. 2006; 12 (6): 1393–1403.

Danišovič Ľ., Lesný P., Havlas V., Teyssler P., Syrová Z., Kopáni M., Fujeríková G., Trč T., Syková E., Jendelo- vá P. Chondrogenic differentiation of human bone mar- row and adipose tissue-derived mesenchymal stem cells. Applied Biomedicine. 2007; 5: 139–150.

Zuk P.A., Zhu M., Mizuno H., Huang J., Futrell W., Katz A.J., Benhaim P., Lorenz P., Hedrik M.H. Multilinea- ge cells from human adipose tissue: implications for cell- based therapies. Tissue engineering. 2001; 17: 211–228.

Egorova V.A., Ponomareva A.S., Bogdanova N.B., Ab- ramov V.Ju., Sevastianov V.I. Characterization of human adipose-derived stem cells phenotype by flow cytometry. Tehnologii zhivyh sistem. 2009; 5: 40–46 (in rus).

Sevastianov V.I., Perova N.V., Nemec E.A., Surguchen- ko V.A., Ponomareva A.S. Examples of experimental and clinical use of biocompatible materials in regenerative medicine / Sevastianov V.I. and Kirpichnikov M.P., edi- tors. Biosovmestimje materialy (Uchebnoe posobie). M.:

«MIA», 2011; II (3): 237–252 (in rus).

Chung C., Burdick J.A. Engineering Cartilage Tissue, Adv. Drug. Deliv. Rev. 2008; 60 (2): 243–260.

Копирование материалов без согласия компании и авторов запрещено!

При использовании материалов сайта другими ресурсами обязательно требуется согласование с компанией АО «БИОМИР сервис» и авторами.

                                           E-mail: post@biomir.biz