Б. Тишинский переулок,
д. 43/20 стр.2
+7 (499) 252-36-09

СРАВНИТЕЛЬНЫЙ МОРФОЛОГИЧЕСКиЙ АНАЛИЗ ИЗОЛИРОВАННЫХ ОСТРОВКОВ ПОДЖЕЛУДОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ КРЫСЫ, КУЛЬТИВИРУЕМЫХ В СТАНДАРТНЫХ УСЛОВИЯХ И С БИОПОЛИМЕРНЫМ МИКРОГЕТЕРОГЕННЫМ КОЛЛАГЕНСОДЕРЖАЩИМ ГЕЛЕМ

Л.А. Кирсанова, Н.В. Баранова, Г.Н. Бубенцова, В.И. Севастьянов

ФГБУ «Федеральный научный центр трансплантологии и искусственных органов имени академика В.И. Шумакова» Минздрава России, Москва, Российская Федерация.


Для корреспонденции: Баранова Наталья Владимировна. Адрес: 123182, Москва, ул. Щукинская, д. 1. Тел. (499) 190-42-66. E-mail: barnats@yandex.ru.

Введение. Внеклеточный матрикс, основным компонентом которого является коллаген, играет сущест- венную роль в сохранении структурной целостности и обеспечении функции островков Лангерганса поджелудочной железы (ПЖ). Даже частичное воссоздание нативного микроокружения может оказать- ся полезным для сохранения жизнеспособности изолированных островков в условиях in vitro и in vivo. Цель. Провести сравнительный морфологический анализ островков крысы, культивируемых с биопо- лимерным микрогетерогенным коллагенсодержащим гидрогелем (БМКГ) и в стандартных условиях in vitro. Материалы и методы. Островки изолировали из ПЖ (n = 11), ориентируясь на классическую мето- дику с использованием коллагеназы, с некоторыми модификациями. Были использованы методы рутин- ного гистологического окрашивания, методы иммунофлуоресценции и иммуногистохимии. Результаты. Oстровки, культивируемые с БМКГ, не обнаруживали признаков деградации структуры и сохраняли жизнеспособность в течение 7 суток культивирования. Вывод. Выявлено позитивное влияние БМКГ на сохранение целостности и жизнеспособности островков.


Ключевые слова: островки Лангерганса, поджелудочная железа, внеклеточный матрикс, культивирование, коллагенсодержащий гель.

MORPHOLOGICAL ANALYSIS OF ISOLATED RAT PANCREATIC ISLETS CULTURED UNDER STANDARD CULTURE TECHNIQUE AND WITH BIOPOLYMER MICROSTRUCTURED COLLAGEN-CONTAINING HYDROGEL

L.A. Kirsanova, N.V. Baranova, G.N. Bubentsova, V.I. Sevastianov

V.I. Shumakov Federal Research Center of Transplantology and Artificial Organs of the Ministry of Healthcare of the Russian Federation, Moscow, Russian Federation


For correspondence: Baranova Natalya Vladimirovna. Address: 1, Shchukinskaya st., Moscow, 123182, Russian Federation. Tel. (499) 190-42-66. E-mail: barnats@yandex.ru

Introuctiond. Extracellular matrix play an essential role in providing structural integrity and physiological sup- port to Langerhans islets in pancreas. Imitation of the native microenvironment can be useful for viability of isolated pancreatic islets in vitro and in vivo. Aim. The purpose of this study was to characterize and compare the effect of biopolymer microstructured collagen-containing hydrogel (BMCH) on isolated rat islets survival. Materials and methods. Islets were isolated by classic collagenase techniques with some modifications. There were used hystological, immunofluorescence and immunohystochemistry methods. Results. Rat islets cultured with collagen-based gel don’t revealed destructive changes of structure and remained viabile 7 days incubation. Conclusion. Positive effect of BMCH to rat islet survival was revealed.

Key words: Langerhans islets, pancreas, extracellular matrix, culture, collagen­containing hydrogel.

ВВЕДЕНИЕ

Трансплантация островков Лангерганса является обещающей альтернативой органной транспланта- ции поджелудочной железы при лечении сахарного диабета и может обеспечивать инсулинонезависи- мость больных на некоторый срок [1, 2]. Ограни- ченное время функционирования трансплантата в определенной степени может быть связано с пов- реждением островков во время процедуры изоля- ции [3, 4]. В процессе выделения островки не толь- ко утрачивают васкуляризацию и иннервацию, но также лишаются связей с внеклеточным матриксом (ВКМ), играющим значимую роль в сохранности островков. Показано, что компоненты ВКМ (кол- лаген, ламинин, фибронектин) участвуют в обес- печении механической поддержки, сохранении це- лостности и функционирования островков [5–8]. Воссоздание (имитация) нативного микроокруже- ния может способствовать сохранению структуры и функции изолированных островков in vitro и in vivo [5, 6, 9, 10].


Наиболее важным по значимости среди компо- нентов ВКМ является коллаген, самый распростра- ненный белок у млекопитающих [9, 10]. В панкреа- тической ткани широко распространены коллагены I и IV типа, которые не только выполняют поддер- живающую, каркасную роль, но и, связываясь с рецепторами трансмембранных белков, оказывают влияние на функции островковых клеток [3, 4, 10]. Показано, что островки, культивируемые на колла- генсодержащих матриксах, длительное время после выделения сохраняли жизнеспособность и прояв- ляли секреторную активность [5, 11]. Транспланта- ция таких островков оказывалась более успешной: островки сохраняли характерную для них архитек- тонику и отвечали секрецией инсулина при стиму- ляции глюкозой [3, 6].


Наибольший, с нашей точки зрения, интерес представляют собой матриксы из многокомпонент- ных гидрогелей, получаемых из тканей сельскохо- зяйственных животных и относящихся к так на- зываемым биомиметикам ВКМ, обеспечивающие сходное с ВКМ микроокружение для роста кле- ток [12]. К таким биомиметикам ВКМ относится биополимерный микроструктурированный колла- генсодержащий гидрогель (БМКГ-матрикс) – мно- гокомпонентный продукт из природных соеди- нений [13]. Функциональная эффективность БМКГ-матрикса была доказана, например, при ле- чении гонартроза и травматических повреждениях периферических нервов [14–16].


Ранее нами было изучено влияние биополимер- ного микрогетерогенного коллагенсодержащего гидрогеля (БМКГ) на органотипические культуры островковых клеток новорожденных кроликов [17].

Известно, что фетальные и неонатальные островко- вые клетки более устойчивы к условиям гипоксии, нежели островки взрослых животных и челове- ка [18], и легче адаптируются к условиям культи- вирования in vitro. Более того, в органотипических культурах помимо островковых клеток присутству- ют и другие клеточные типы – протоковый эпите- лий, фибробласты. Согласно Федеральному закону от 23 июня 2016 г. № 180-ФЗ «О биомедицинских клеточных продуктах», при разработке биомеди- цинских клеточных продуктов, в том числе клеточ- но-инженерных конструкций поджелудочной желе- зы (КИК ПЖ для лечения сахарного диабета), могут быть использованы только культуры ОЛ взрослого организма. В связи с этим актуальной и практичес- ки важной задачей является поиск способов повы- шения функциональной эффективности клеточной компоненты КИК ПЖ.

Настоящая работа посвящена исследованию влияния матрикса БМКГ на жизнеспособность и со- хранность изолированных ОЛ половозрелых крыс в процессе их культивирования.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Экспериментальные животные

Исследования проводили на половозрелых кры- сах-самцах линии Vistar (180–220 г), полученных из питомника лабораторных животных ФГУП ОПХ

«Манихино». Акклиматизацию и содержание лабо- раторных животных осуществляли в соответствии с ГОСТ ISO 10993-2-2009 «Изделия медицинские. Оценка биологического действия медицинских из- делий». Часть 2. «Требования к обращению с жи- вотными».

Все манипуляции с животными проводили в со- ответствии с «Правилами проведения работ с ис- пользованием экспериментальных животных» от 1973 г. и правилами, принятыми Европейской кон- венцией по защите позвоночных животных, исполь- зуемых для исследований и других научных целей (European Convention for the Protection of Vertebrate Animals Used for Experimental and other Scientific Purposes (ETS 123) Strasbourg, 1986).


Коллагенсодержащий матрикс

В качестве коллагенсодержащего матрикса при культивировании островков Лангерганса (ОЛ) был выбран БМКГ-матрикс из линейного ряда компо- зиции имплантируемого гетерогенного геля (рег. уд. № ФСР 2012/13033 от 15.07.2015 г., торговый знак Сферо®ГЕЛЬ, АО «Биомир сервис», г. Крас- нознаменск) [19]. Ранее проведенные исследования показали, что из существующего линейного ряда БМКГ-матриксов оптимальным для клеточно- и тканеинженерных конструкций является БМКГ со следующими характеристиками: средний размер микрочастиц – 145,79 ± 0,09 мкм; модуль упругос- ти – 1170 ± 12 Па; модуль вязкости – 62,9 ± 7,9 Па; набухаемость – не ниже 86,6 ± 3,0 масс.%; время резорбции – до 9 месяцев.


Рис. 1

Поджелудочная железа крысы: 

а – непосредствен- но после взятия (интактная железа); 

б – после обработки раствором коллагеназы

Rat pancreas: 

a – intact gland; 

б – gland after injection collagenase solution

Изоляция островков лангерганса

Островки Лангерганса выделяли из поджелу- дочной железы 11 крыс. Процедуру выделения ос- тровков проводили, ориентируясь на классическую методику с использованием коллагеназы с некото- рыми модификациями [20, 21].


Cубтотально удаленную в стерильных условиях поджелудочную железу помещали в чашку Петри. Затем интрапаренхиматозно несколькими последо- вательными инъекциями вводили 10 мл раствора коллагеназы I типа («Sigma», активность 150 ед./мл) (рис. 1). Растянутую таким образом железу аккурат- но разделяли на 10–12 равных частей, переносили во флакон и инкубировали 40 мин при 37,0–37,5 °С. Переваривание останавливали добавлением холод- ного (4 °С) раствора Хенкса. Флакон с дезагрегиро- ванной панкреатической тканью мягко встряхивали вручную в течение нескольких секунд. Образовав- шиеся мелкие фрагменты фильтровали через метал- лическое сито с диаметром ячеек 0,6 мм. Перевар собирали в конические пробирки и центрифугиро- вали 1 мин при скорости 600 об./мин.


Оценка содержимого осадка и надосадочной жидкости, проведенная с помощью инвертирован- ного микроскопа (Nikon Eclipse TS 100), показала, что на дно пробирок осаждались клетки ацинарной ткани и одиночные островки. Основная масса ост- ровков обнаруживалась в надосадочной жидкости (супернатанте). Супернатант осторожно переноси- ли в центрифужную пробирку и дважды отмывали 1 мин при 1100 об./мин.


Идентификация и подсчет островков

Идентификацию и подсчет островков осуществ- ляли, проводя окрашивание дитизоном. В чашку Петри вносили 0,2–0,4 мл тканевой взвеси, добав- ляли 0,1–0,2 мл раствора дитизона и инкубирова- ли в термостате в течение 20–30 мин при 37,0 °С. Дитизон избирательно окрашивал панкреатические островки, при этом ацинарные клетки оставались неокрашенными. Подсчет окрашенных островков проводили с помощью инвертированного микро- скопа при увеличении объектива ×10.


Культивирование изолированных островков лангерганса

Изолированные ОЛ ресуспендировали в среде DMEM, содержащей глюкозу (4,5 г/л), 10% эмбрио- нальную телячью сыворотку, 2 мМ L-глутамина, 1 М Hepes и 80 мкг/мл гентамицина и по 1,5–2,0 мл вносили в 25 см2 культуральные флаконы. Культи- вирование проводили при 37,0 °С в увлажненной атмосфере, содержащей 5% СО2. Смену культураль- ной среды осуществляли через 2 суток инкубации.

Ежедневный мониторинг и фотосъемку куль- тивируемых островков проводили с помощью ин- вертированного микроскопа Nikon Eclipse TS 100 (Nikon, Япония), оснащенного цифровой фотока- мерой.

На третьи сутки инкубации в один из культу- ральных флаконов вводили 0,5–0,7 мл БМКГ и про- должали культивирование в прежних условиях до

достижения недельного срока. Островки, культиви- рованные без добавления БМКГ, рассматривались в качестве контроля.

Прижизненное окрашивание панкреатических островков

Для определения жизнеспособности культиви- руемых островков проводили иммунофлуоресцент- ное окрашивание акридиновым оранжевым и про- пидиум-йодидом на 3-и и 6-е сутки инкубации. Для этого 0,2–0,4 мл культуральной взвеси, содержащей островки, помещали в чашку Петри, добавляли 0,02–0,03 мл готового раствора красителей и инку- бировали в темноте в течение 15–17 мин. Результат оценивали c помощью люминесцентного микроско- па Nikon Eclipse 50i (Nikon, Япония). Жизнеспо- собные клетки демонстрировали зеленую флуорес- ценцию, тогда как погибшие клетки, окрашенные пропидиум-иодидом, приобретали красную.


Гистологическое исследование островков Для гистологического исследования свежевы- деленные островки и островки, культивирован-

ные в течение 6–7 суток, фиксировали в смеси Буэна, обезвоживали в спиртах восходящей кон- центрации, выдерживали в смеси спирта и ксило- ла, ксилоле и заливали в парафин. Срезы толщи- ной 4–5 мкм, полученные на микротоме Leica RM 2245, депарафинировали, регидратировали и окра- шивали гематоксилином и эозином, а также мето- дом иммуногистохимии по классической методике с пероксидазой хрена и использованием антител к инсулину (anti-insulin, «Sigma»). Образование ко- ричневого преципитата в цитоплазме клеток в ре- зультате иммуногистохимического окрашивания позволяло идентифицировать инсулинпозитивные β-клетки в островках.

Рис. 2

Свежевыделенные панкреатические островки крысы: а – наблюдение в инвертированном микроскопе. ×100; б – иммуногистохимическое окрашивание антителами к инсулину. ×200


Fresh isolated rat pancreatic islets: a – under inverted microscope. ×100; 

б – immunohistochemical staining with anti- insulin antibodies. ×200


РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Свежевыделенные островки

Свежевыделенные островки, наблюдаемые в инвертированном микроскопе, демонстрировали в основном округлую или овальную форму и сохра- няли целостность, что свидетельствовало о том, что в процессе изоляции макроструктура островков не пострадала (не была повреждена) (рис. 2, а). Значи- тельная часть островков имела ровную поверхность, тогда как на поверхности некоторых островков об- наруживались неровности, шероховатости, образо- ванные остатками окружающей экзокринной ткани. Окрашивание дитизоном придавало островкам терракотово-красный цвет и позволяло не только идентифицировать островки (рис. 3), но и подсчи- тать их количество: в 1 мл клеточной взвеси содер- жалось 235 ± 32 островка, а в целом из одной ПЖ крысы нам удавалось выделить 700–800 островков. Проведенное гистологическое исследование по- казало, что островки на данном этапе сохраняли характерную для них структуру с преобладанием инсулинпозитивных β-клеток (рис. 2, б).


Культивированные островки

Наблюдение в инвертированном микроскопе показало, что островки, опытные и контрольные, в течение первых трех суток культивирования со- храняли первоначальные внешние характеристики. Прижизненное окрашивание акридиновым оран- жевым и пропидиум-иодидом в люминесцентном микроскопе продемонстрировало зеленую флуо- ресценцию островков, подтверждающую их жизнеспособность (рис. 4, а). Одиночные, окрашенные в красный цвет пропидиум-иодидом, погибшие аци- нарные клетки обнаруживались лишь в культураль- ной среде, окружающей островки.

Рис. 3

Изолированные островки, окрашенные дитизоном. 

Наблюдение в инвертированном микроскопе. ×100


 Isolated rat islets, dithizone staining. Inverted micro- scope. ×100

Необходимо отметить, что островки, культивиро- ванные с коллагенсодержащим гелем, не проявляли адгезивных качеств, и находясь в непосредственной близости, не прикреплялись к гелю в течение всего срока наблюдения.

Через 6 суток культивирования наблюдаемая в инвертированный микроскоп Nikon Eclipse TS 100 морфологическая картина менялась. Обнару- живалось, что поверхность контрольных остров- ков приобретала неровные очертания, становилась бугристой. В некоторых островках наблюдалось появление полостей, а в отдельных островках от- мечались признаки фрагментации (рис. 5, а). Прижизненное окрашивание акридиновым оранжевым

и пропидиум-иодидом выявляло в сохранившихся островках наряду с живыми появление погибших клеток с красной флуоресценцией (рис. 4, б), что коррелировало с гистологической картиной, выяв- ляющей в таких островках многочисленные клетки с пикнотичными ядрами (рис. 5, б). Таким образом, на рубеже 6 суток культивирования большая часть контрольных островков претерпевала деструктив- ные изменения.

Рис. 4

 Иммунофлуоресцентное окрашивание контрольных островков. Акридиновый оранжевый и пропидиум-иодид.

×100: а – 3 суток культивирования; б – 6 суток культивирования. Погибшие клетки, окрашенные пропидиум-иодидом в красный цвет (указаны стрелками)


Immunofluorescence, acridine orange and propidium-iodide staining. ×100: a – 3 days incubation; б – 6 days incuba- tion. Dead cells by propidium-iodid staining (arrows)

Рис. 5

Деструктивные изменения контрольных островков: а – наблюдение в инвертированном микроскопе. ×100; б – пикнотичные ядра в клетках разрушающегося островка, гематоксилин и эозин. ×200

Destructive changes of the control islets: a – under inverted microscope. ×100; б – cell picnotic nucleus in destroyed islet, haematoxylin and eosin. ×200

Рис. 6

Иммунофлуоресцентное окрашивание опытных островков. Акридиновый оранжевый и пропидиум-ио- дид. 6 суток инкубации. ×100

Immunofluorescence, acridine orange and propidium- iodide staining. 6 days incubation. ×100

Островки, культивируемые с коллагенсодержа- щим матриксом, не обнаруживали признаков дегра- дации структуры в течение 7 суток культивирования (рис. 7, а). Иммунофлуоресцентное окрашивание подтверждало жизнеспособность опытных остров- ков (рис. 6). Гистологическое исследование ОЛ по- казало, что через 7 суток культивирования остров- ки сохраняли целостность, не фрагментировались. При окрашивании гематоксилином и эозином ОЛ

представляли компактные образования, состоящие из некрупных светлых полигональных клеток с мелкозернистой цитоплазмой и четко очерченным сферической формы ядром. В ядре определялось крупное ядрышко и мелкодиспергированный хро- матин (рис. 7, б, в). Описываемая гистологическая картина свидетельствовала о сохранении не толь- ко макроструктуры, но и базовой микроструктуры островков. При окрашивании антителами к инсу- лину подавляющее большинство клеток в ОЛ ока- зывалось иммунопозитивными β-клетками с обиль- ной специфической зернистостью в цитоплазме (рис. 7, г, д).

Рис. 7

Островки крысы, культивированные с коллагенсо- держащим гелем. Семь суток культивирования (5 суток с гелем): а – островки, наблюдаемые в инвертированном микроскопе, ×100; б – гематоксилин и эозин, ×200; в – ге- матоксилин и эозин, ×400; г – иммуногистохимическое ок- рашивание антителами к инсулину, ×100, д – иммуногис- тохимическое окрашивание антителами к инсулину, ×400


Rat islets cultured with collagen-containing hydrogel. Seven days incubation (5 days with gel): a – islets under in- vert microscope, ×100; б – haematoxylin and eosin, ×200; в – haematoxylin and eosin, ×400; г – immunohistochemical staining with anti-insulin antibodies, Abundant β-cells in is- let. ×100; д – immunohistochemical staining with anti-insu- lin antibodies, Abundant β-cells in islet. ×400

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

На основании проведенного морфологического анализа можно сделать вывод о том, что культи- вирование изолированных ОЛ с биополимерным микрогетерогенным коллагенсодержащим гидроге- лем – биомиметиком внеклеточного матрикса, обла- дающего биоактивными свойствами и обеспечива- ющего для изолированных островков ПЖ сходное с нативным ВКМ микроокружение (нишу), обеспечи- вает их жизнеспособность, сохраняет целостность и характерную структуру in vitro в течение 7 суток. В то же время при культивировании в стандартных условиях (без добавления матрикса) культуры изо- лированных ОЛ к 6 суткам инкубации претерпевали деструктивные изменения.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ / referenceS

Shapiro AM, Hao EG, Lakey JR, Yakimets WJ, Chur­ chill TA, Mitlianga PG, Papadopoulos GK et al. Novel approaches toward early diagnosis of islet allograft re- jection. Transplantation. 2001 Jun 27; 71 (12); 1709– 1718. PMID: 11455247.

Shapiro AM, Pokrywczynska M, Ricordi C. Clinical pancreatic islet transplantation. Nat. Rev. Endocrinol. 2016 Nov 11. doi: 10.1038/nrendo.2016.178. PMID: 27834384.

Llacua A, de Haan BJ, Sminc SA, de Vos P. Extracel- lular matrix components supporting humanislet function in alginate-based immunoprotective microcapsules for treatment of diabetes. J. Biomed. Mater. Res. A. 2016 Jul; 104 (7): 1788–1796. doi: 10.1002/jbm.a.35706.

Stendahl JC, Kaufman DB, Stupp SI. Extracellular mat- rix in pancreatic islets: relevance to scaffold design and transplantation. Cell Transplantation. 2009; 18 (1): 1–12.

Abualhassan N, Sapozhnikov L, Pawlick RL, Kahana M, Pepper AR, Bruni A, Gala­Lopez B et al. Lung-derived microscaffolds facilitate diabetes reversal after mouse and human intraperitoneal islet transplantation. PLoS One. 2016 May 26; 11 (5): e0156053. doi: 10.1371/jour- nal.pone.0156053. e Collection 2016. PMID 27227978.

Amer LD, Mahoney MJ, Bryant SJ. Tissue engineering approaches to cell-based type 1 diabetes therapy. Tissueengineering. 2014; part B, 20 (5): 455–467. doi: 10.1089/

ten.TEB.2013.04.62. PMID: 24417705.

Hynes RO. The extracellular matrix: not just pretty fib- rils. Science. 2009 Nov 27; 326 (5957): 1216–1219. doi: 10.1126/science.1176009. PMID: 19965464.

Tziampazis E, Sambanis A. Tissue engineering of a bioar- tificial pancreas: modeling the cell environment and de- vice function. Biotechnol. Prog. 1995 Mar-Apr; 11 (2): 115–126. doi: 10.1021/bp00032a001. PMID: 7766095.

Ko JH, Kim YH, Jeong SH, Lee S, Park SN, Shim IK, Kim SC. Collagen esterification enhances the β-cells in 2D and 3D culture systemes. Biochem. Blophys. Res. Commun. 2015 Aug 7; 483 (4): 1084–1090. doi: 10.1016/ j.bbrc.2015.06.062. PMID: 26079884.

Riopel M, Wang R. Collagen matrix support of pancrea- tic islet survival and function. Front. Biosci. (Landmark Ed). 2014 Jan 1; 19: 77–90. PMID: 24389173.

Szebeni GJ, Tancos Z, Feher LZ, Alfoldi R, Kobolak J, Dinnyes A, Puskas LG. Real architecture for 3D Tissue (RAFT) culture system improves viability and maintains insulin and glucagon production of mouse pancreatic islet cells. Cytotechnology. 2017; 69 (2): 359–369. doi: 10.1007/s10616-017-0067-6. PMID: 28/81140.

Fisher SA, Tam RY, Shoichet MS. Tissue mimetics: engi- neered hydrogel matrices provide biomimetic environ- ments for cell growth. Tissue Engineering. 2014; Part A, 20 (5, 6): 895–898.

Севастьянов ВИ, Перова НВ. Инъекционный гетеро- генный биополимерный гидрогель для заместитель- ной и регенеративной хирургии и способ его получе- ния. Патент РФ № 2433828 (2011). Sevast’yanov VI, Perova NV. In’’ekcionnyj geterogennyj biopolimernyj gidrogel’ dlya zamestitel’noj i regenerativnoj hirurgii i sposob ego polucheniya. Patent RF № 2433828 (2011).

Соловьева ИВ, Шестерня Н, Перова НВ, Севастья­ нов ВИ. Комбинированное применение биополимер- ного гетерогенного гидрогеля и гиалуроновой кис- лоты при ОА (первый опыт). Врач. 2016; 1: 12–17. Solovyeva IV, Shesternya N, Perova NV, Sevastianov VI. Coadministration of heterogeneous biopolymer hydrogel and hyaluronic acid in osteoarthritis: the first experience. Vrach. 2016; 1: 12–17.

Соловьева ИВ, Перова НВ, Севастьянов ВИ. Воз- можности применения биополимерного микрогете- рогенного коллагенсодержащего геля при травмах и заболеваниях опорно-двигательного аппарата. Современная медицина. 2016; 2: 66–69. Solov’eva IV, Perova NV, Sevast’yanov VI. Vozmozhnosti primeneniya biopolimernogo mikrogeterogennogo kollagensoder- zhashchego gelya pri travmah i zabolevaniyah oporno- dvigatel’nogo apparata. Sovremennaya medicina. 2016; 2: 66–69.

Федяков АГ, Древаль ОН, Севастьянов ВИ, Перо­ ва НВ, Кузнецов АВ, Чапандзе ГН. Эксперименталь- но-клиническое обоснование применения биодегра- дируемых имплантатов в хирургическом лечении поражений периферических нервов. Вопросы ней­ рохирургии им. Н.Н. Бурденко. 2010; 3: 15–18. Fe­ dyakov AG, Dreval’ ON, Sevast’yanov VI, Perova NV, Kuznecov AV, Chapandze GN. Ehksperimental’no-klinicheskoe obosnovanie primeneniya biodegradiruemyh implantatov v hirurgicheskom lechenii porazhenij peri- fericheskih nervov. Voprosy nejrohirurgii im. N.N. Bur­ denko. 2010; 3: 15–18.

Скалецкий НН, Кирсанова ЛА, Севастьянов ВИ. Раз- работка и экспериментальное исследование ткане- инженерных конструкций поджелудочной железы из культур островковых клеток поджелудочной железы и биодеградируемых носителей с целью стимуляции регенерации β-клеток у больных сахарным диабетом. Трансплантология: итоги и перспективы. 2014; VI: 120–124. Skaletskiy NN, Kirsanova LA, Sevastianov VI. Development and experimental research cell-enginee- ring constructs from cultures of pancreatic islet cells and biodegradable scaffolds in order to stimulate the regene- ration of β-cells in patients with diabetes. Transplantati­ on: results and prospects. 2014; VI: 120–124.

Hawthorne WJ, Simond DM, Stokes R, Patel AT, Wal­ ters S, Burgess J, O Connell PJ. Subcapsular fetal pig pancreas fragment transplantation provides normal blood glucose control in a preclinical model diabetes. Transplantation. 2011 Mar 15; 91 (5): 515–521. doi: 10.1097/TP.0b013e3182079474. PMID: 21183867.

Готье СВ, Шагидулин МЮ, Онищенко НА, Севас­ тьянов ВИ. Разработка и экспериментальное иссле- дование тканеинженерных конструкций печени из ассоциатов клеток печени и биодеградируемых но- сителей. Трансплантология: итоги и перспективы. 2014; VI: 131–136. Gautier SV, Shagidulin MY, Oni­ shchenko NA, Sevastianov VI. Development and expe- rimental research hepar cell-engineering constructs from hepatocytes and biodegrable scaffolds. Transplantation: results and prospects. 2014; VI: 131–136.

Berney T, Molano RD, Cattan P, Pileggi A, Vizzardelli C, Oliver R, Ricordi C, Inveradi L. Endotoxin-mediated delayed islet graft function is associated with increased intra-islet cytokine production and islet cell apoptpsis. Transplantation. 2001 Jan 15; 71 (1): 125–132. PMID: 11211177.

Kenmochi T, Asano T, Jingu K, Iwashita C, Miyauchi H, Takahashi S, Saito T, Ochiai T. Development of a ful- ly automaited islet digestion system. Transplant. Proc. 2000 Mar; 32 (2): 341–343. PMID: 10715434.

Копирование материалов без согласия компании и авторов запрещено!

При использовании материалов сайта другими ресурсами обязательно требуется согласование с компанией АО «БИОМИР сервис» и авторами.

АО "БИОМИР сервис"
Б. Тишинский переулок,
д. 43/20 стр.2
+7 (499) 252-36-09